Пилотное исследование, проведенное нами на «прямых» препаратах из хориона и эмбриональных тканей плода у двух эмбрионов с нормальным кариотипом 5/6 недель развития, показало, что в целом число и распределение М-сегментов по хромосомам в эмбриональных клетках соответствует М-сегментации хромосом лимфоцитов *
(рис. 10.26 а, б) . Однако, если в лимфоцитах гетероморфизм гомологов по интенсивности флуоресценции АТ-МеС касался только районов 1qh, 9qh, 16qh и коротких плеч хромосом групп D и G, то в клетках эмбрионов I триместра развития такие различия обнаружены для большинства хромосом набора. Аналогичное явление отмечалось нами при анализе статуса метилирования хромосом в цитотрофобласте хориона методом ник-трансляции in situ с предобработками ДНКазой1 и рестриктазой Нра11 (см. раздел 10.2.6). Сравнение локализации гомологичных сегментов, отличающихся по интенсивности флуоресценции АТ-МеС и ник-трансляционного сигнала, показало, что спектр таких сегментов зависит от метода детекции метилированных участков. Например, доказанные методом
ник-трансляции с предобработкой Нра11 различия по уровню мети*
лирования локуса 15q11-q13 в эмбриональных клетках (рис. 10.17) ,
оказались не выявлены иммуноцитохимическим методом (рис. 10.26,
*
а, б) . Дискордантность полученных результатов в значительной мере определяется разрешающей способностью методов. Считается, что иммуноцитохимический метод уступает в чувствительности методу ник-трансляции in situ, опосредованной рестриктазами, и мало пригоден для детекции различий в степени метилирования хромосом на уровне отдельных сегментов [610]. Между тем, тканеспецифичные различия по степени метилирования гомологов в импринтирован- ном локусе — 11р15 подтверждаются двумя обсуждаемыми методами (рис. 10.18 и 10.26 а - в) . Не вызывают сомнения также межтканевые различия в уровне метилирования районов прицентромерного
гетерохроматина хромосом 1, 9 и 16, наглядно продемонстрирован*
ные как при использовании метода ник-трансляции (рис. 10.19) , так
*
и при помощи АТ-МеС (рис. 10.26, а - в) . Однако вывод о различном уровне метилирования R- и G-сегментов гомологичных хромосом в разных тканях, основанный на визуальной оценке интенсивности флуоресцентных сигналов, требует серьезных доказательств, которые могут быть получены путем кропотливого анализа особенностей М-сегментации хромосом в клетках, имеющих различное эмбриональное происхождение.