Один из объективных методов, позволяющих проводить прямой анализ хромосомного набора единичных сперматозоидов человека, основан на оплодотворении in vitro освобожденных от блестящей оболочки яйцеклеток хомячка сперматозоидами человека и последующей визуализации хромосом мужского пронуклеуса [597, 770]. После обработки через 12-14 часов оплодотворенных яйцеклеток колхицином препараты фиксируют [536, 827] и дифференциально окрашивают.
С помощью этого метода удалось установить ряд принципиально важных сведений о частоте и спектре аномалий хромосом в мейозе у здоровых доноров, а также о влиянии различных факторов на сперматогенез. В общей сложности от здоровых доноров в возрасте от 18 до 65 лет проанализировано более 20 тысяч хромосомных комплементов зрелых сперматозоидов [451]. Трудоемкость, высокая себестоимость, необходимость значительных временных затрат существенно лимитируют возможности широкого применения метода гетерологичного оплодотворения. В настоящее время он утратил свою актуальность и используется в ограниченном числе центров.
Новый импульс исследованиям в этом направлении может дать метод микроинъекции сперматозоидов человека в яйцеклетки — метод ICSI (Intra Cytoplasmic Sperm Injection) (рис. 4.5). Разработанный с целью лечения мужского бесплодия этот метод с успехом применяется в настоящее время и для исследования хромосом мужского пронуклеуса после оплодотворения, осуществляемого путем инъекции сперматозоида человека непосредственно в яйцеклетку лабораторной мыши [185, 193, 508]. Метод исключает селекцию спермиев по их оплодотворяющей способности, что повышает вероятность детекции хромосомных аномалий (см. главу 5).
С помощью этого метода удалось установить ряд принципиально важных сведений о частоте и спектре аномалий хромосом в мейозе у здоровых доноров, а также о влиянии различных факторов на сперматогенез. В общей сложности от здоровых доноров в возрасте от 18 до 65 лет проанализировано более 20 тысяч хромосомных комплементов зрелых сперматозоидов [451]. Трудоемкость, высокая себестоимость, необходимость значительных временных затрат существенно лимитируют возможности широкого применения метода гетерологичного оплодотворения. В настоящее время он утратил свою актуальность и используется в ограниченном числе центров.
Новый импульс исследованиям в этом направлении может дать метод микроинъекции сперматозоидов человека в яйцеклетки — метод ICSI (Intra Cytoplasmic Sperm Injection) (рис. 4.5). Разработанный с целью лечения мужского бесплодия этот метод с успехом применяется в настоящее время и для исследования хромосом мужского пронуклеуса после оплодотворения, осуществляемого путем инъекции сперматозоида человека непосредственно в яйцеклетку лабораторной мыши [185, 193, 508]. Метод исключает селекцию спермиев по их оплодотворяющей способности, что повышает вероятность детекции хромосомных аномалий (см. главу 5).