Относительно новым прямым методом анализа числовых хромосомных аномалий в зрелых сперматозоидах человека является метод гибридизации in situ. Преимущества метода заключаются в скорости анализа и масштабности исследования. Однако его возможности ограничены регистрацией численных аберраций отдельных хромосом или их локусов, маркированных ДНК-зондами. Попытки изучения струк-
Рис. 4.5. Процедуры микроманипуляции для анализа хромосомного набора сперматозоидов с помощью внутрицитоплазматической инъекции сперматозоида человека в ооциты мыши (Intra Cytoplasmic Sperm Injection): а — надрезание блестящей оболочки ооцита мыши, б — иммобилизация сперматозоида, в — инъекция сперматозоида человека в ооцит мыши, г — метафазные хромосомы человека из мужского пронуклеуса (слева) и метафазные хромосомы мыши из женского пронуклеуса (справа) (окраска QFH/AcDj
турных аберраций были удачными лишь в одном исследовании [864]. Обычно используется мультиплексная (двух-, трехцветная) FISH c прицентромерными ДНК-зондами, которая позволяет отличить истинную дисомию по какой-либо хромосоме от диплоидии [812].
Существенное значение для FISH-анализа сперматозоидов имеют как способы приготовления препаратов (деконденсация хроматина в головке спермия), так и условия проведения гибридизации. Для повышения эффективности гибридизации разработаны различные варианты деконденсации хроматина [407, 475, 617, 621, 791]. Одним из главных требований является сохранность морфологии сперматозоида, включая наличие хвоста после предгибридизационных обработок *
(рис. 4.6) . Разработаны также унифицированные критерии оценки гибридизационного сигнала [451, 674].
Рис. 4.5. Процедуры микроманипуляции для анализа хромосомного набора сперматозоидов с помощью внутрицитоплазматической инъекции сперматозоида человека в ооциты мыши (Intra Cytoplasmic Sperm Injection): а — надрезание блестящей оболочки ооцита мыши, б — иммобилизация сперматозоида, в — инъекция сперматозоида человека в ооцит мыши, г — метафазные хромосомы человека из мужского пронуклеуса (слева) и метафазные хромосомы мыши из женского пронуклеуса (справа) (окраска QFH/AcDj
турных аберраций были удачными лишь в одном исследовании [864]. Обычно используется мультиплексная (двух-, трехцветная) FISH c прицентромерными ДНК-зондами, которая позволяет отличить истинную дисомию по какой-либо хромосоме от диплоидии [812].
Существенное значение для FISH-анализа сперматозоидов имеют как способы приготовления препаратов (деконденсация хроматина в головке спермия), так и условия проведения гибридизации. Для повышения эффективности гибридизации разработаны различные варианты деконденсации хроматина [407, 475, 617, 621, 791]. Одним из главных требований является сохранность морфологии сперматозоида, включая наличие хвоста после предгибридизационных обработок *
(рис. 4.6) . Разработаны также унифицированные критерии оценки гибридизационного сигнала [451, 674].