Кариотипирование плода на любом сроке беременности представляет собой длительный, кропотливый труд врачей-цитогене- тиков, который нередко является основным фактором, лимитирующим объем и эффективность работы центров ПД.
В последние годы разработана и уже широко применяется за рубежом молекулярная диагностика наиболее частых анеуплоидий, таких как трисомия 21 (синдром Дауна), трисомия 13 (синдром Патау), трисомия 18 (синдром Эдвардса), моносомия Х (синдром Шерешевского-Тернера), другие нарушения числа гоносом. На долю этих хромосом приходится почти 99 % нарушений кариотипа, совместимых с живорождением и приводящих к хромосомным болезням в постнатальном периоде. Метод получил название флуоресцентной количественной ПЦР (Quantitative Fluorescent PCR — QF-PCR). Принцип метода заключается в одновременной амплификации полиморфных по длине небольших фрагментов ДНК, расположенных на каждой из вышеперечисленных хромосом. При этом благодаря использованию в реакции ПЦР специальных флуорохромов каждый из продуктов амплификации легко дискриминируется после разделения на электрофорезе, а применение специального сканера для считывания гелей позволяет точно определить дозу амплифицированной ДНК каждого фрагмента отдельной хромосомы. Наличие тройной дозы (трех копий) какого-нибудь фрагмента доказывает трисомию соответствующей хромосомы, двойной дозы — нормальный диплоидный набор, а одинарной — моносомию. Результаты детекции количественных хромосомных аберраций с помощью молекулярных методов приведены на рисунке 9.11. Быстрота анализа (в среднем, 24-27 часов), эффективность 98 %, практическое отсутствие ложноположительных или ложноотрицательных результатов, огромная пропускная способность (одновременное сканирование 300-3000 образцов) открывают большие диагностические перспективы перед этим методом, уже получившим второе название — тест быстрого скрининга анеуплоидии (ТБСА).
Важно подчеркнуть, что этот тест отнюдь не подменяет традиционного кариотипирования, но позволяет оперативно выявить плоды с хромосомной патологией, в том числе и с хромосомным мозаи- цизмом, кариотип которых будет в дальнейшем детально проанализирован.
Рис. 9.11. Метод количественной ПЦР (QF-PCR)
Таким образом, ТБСА следует рассматривать как важное подспорье для кариотипирования, как новый эффективный скринирующий тест, который может быть с успехом применен для анализа образцов амниотической жидкости или хориона/плаценты у женщин групп высокого риска, сформированных по результатам биохимического и ультразвукового скрининга.
Серьезным недостатком ТБСА является достаточно высокая стоимость приборного обеспечения и реагентов для проведения QF-PCR.