Культуральное исследование является высокочувствительным и специфическим методом лабораторной диагностики микозов. Его необходимо производить независимо от результатов микроскопии, так как культуральный метод позволяет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную терапию и профилактику заболевания. Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм микозов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.
Перед посевом патологического материала его расщепляют на предметном стекле на мелкие кусочки, 5 - 6 из них переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1 - 2 см один от другого. Материалом одной пробы засевают не менее 2 - 3 пробирок (волосы) или 4 - 5 пробирок (кожные и ногтевые чешуйки). Для первичной изоляции дерматофитов лучше всего пригодны стандартная агари-зированная среда Сабуро с 2 - 4% глюкозы или сусло-агар, содержащие антибиотики (пенициллин 50 мкг/мл + стрептомицин или биомицин (50 мкг/мл и 200 мкг/мл соответственно) и антидрожжевой антибиотик актидон (циклогексамид) 0,1 - 0,5 мг/мл. Актидон не влияет на рост дерматофитов и подавляет многие плесневые грибы, а также виды Candida и Cryptococcus [Аравийский Р. А., Горшкова Г. И., 1995].
Посев производят в боксе над пламенем газовой или спиртовой горелки платиновой петлей, микологическим крючком или лопаточкой из нихрома. Держа пробирку в левой руке, охватывают ее над пламенем горелки, захватывая пробку мизинцем правой руки, которой одновременно держат петлю. Прокаленную докрасна петлю остужают и одновременно увлажняют прикосновением к поверхности среды в стороне от места предполагаемого посева. Затем берут частицу материала и наносят на поверхность агара. Пробирку закрывают пробкой, предварительно обожженной над пламенем. Так же производят пересев из пробирки в пробирку.
Аналогичным образом производят посев на чашку Петри. Необходимо, чтобы имеющаяся в ней среда как можно меньше соприкасалась с окружающим воздухом, поэтому крышку следует приподнимать настолько, чтобы в нее свободно могла пройти только петля с патологическим материалом.
Посевы инкубируют при 22 - 30 °С (лучше всего 28 °С). Появление роста дерматофитов отмечается с 4-го по 12-й день инкубации в точках посева по краям внесенного материала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считаются отрицательными. В оптимальных условиях первичные культуры многих дерматофитов можно идентифицировать на 7 - 10-й день после посева, но следить за посевами нужно в течение 20 - 30 дней. Первичные культуры растут сравнительно медленно, при появлении роста в первичным посеве необходимо произвести отсев от края колонии на свежую дифференциальную среду для получения чистой культуры, которая будет служить материалом для идентификации выделенного дерматофита.