Рисунок хромосом при R-окраске противоположен G-рисунку, что делает его незаменимым для анализа некоторых типов аберраций, особенно при идентификации ломкой Х-хромосомы на дифференциально окрашенных препаратах. Несмотря на то, что метод очень капризен, ему отдают предпочтение как основному методу дифференциального окрашивания в некоторых зарубежных лабораториях.
Растворы
Протокол 3.6 [875]
Протокол 3.7 (RHG-метод)
Протокол 3.8 (RFA-метод)
Примечания
Растворы
- 06.М фосфатный буфер Соренсена.
Протокол 3.6 [875]
- Препараты инкубировать в предварительно нагретом буферном растворе. Температуру и время подбирать для каждой партии препаратов эмпирически, увеличивая жесткость обработки в зависимости от времени хранения препаратов (6-10 мин при 85 °С для препаратов 10-30-дневной давности и 60-120 мин при 87 °С для односуточных).
- Промыть препараты в порции буфера при комнатной температуре и затем проточной дистиллированной водой.
- Провести препараты через серию спиртов повышающейся концентрации (70 °, 80 °, 96 °). Этот этап не является строго обязательным, его используют только в случае чрезмерного разбухания хромосом вследствие предобработки.
Протокол 3.7 (RHG-метод)
- Окрашивать препараты красителем Гимза (4-5 % в буфере Соренсена, рН 6,7) 10-12 мин.
- Смыть краситель проточной водой, высушить.
- Анализировать препараты в проходящем свете с фазово-контрастным устройством.
Протокол 3.8 (RFA-метод)
- Окрашивать препараты акридиновым оранжевым (0,01 % в буфере Соренсена, рН 6,5) 4-5 мин.
- Промыть препараты тем же буферным раствором 1 мин, заключить под покровное стекло в каплю того же буферного раствора.
- Анализировать на люминесцентном микроскопе при длине волны 450-500 нм.
Примечания
- Свежеприготовленные препараты нуждаются в более длительной обработке. Однако следует иметь в виду, что при увеличении продолжительности обработки тип окрашивания может видоизменяться в направлении R-, RT-, TC-, С-рисунков.
- RHG-метод требует подбора условий для каждой новой партии препаратов и красителя Гимза.
- RFA-метод позволяет получить более стабильный рисунок.