Согласно методическим указаниям по микробиологическому контролю в аптеках (№3182-84 от 29 декабря 1984 г.), вода забирается для исследования на разных этапах ее получения, хранения, использования с соблюдением правил асептики: конец бюретки предварительно обжигают в пламени ваты, смоченной спиртом, дают стечь первой порции, затем забирают воду в стерильные флаконы, закрывая их стерильными ватными пробками. Аналогично производят отбор проб из тройников с внешним выводом и краном при значительной длине трубопровода. С момента забора воды до ее микробиологического исследования должно проходить не более 1,5 часов (увеличение микробной массы).
1. Определение ОМЧ воды до стерилизации.
По 1 мл исследуемой воды вносят в 2 чашки Петри с расплавленным и охлажденным до 40—45 оС МПА, тщательно перемешивают и выдерживают сутки в термостате при 37 °С, затем двое суток при комнатной температуре. После инкубации ведется подсчет выросших колоний на 2 чашках и определяется среднее арифметическое.
Для выявления плесневых и дрожжевых грибов по 0,5 мл исследуемой воды засевают в чашки Петри на среду Сабуро и инкубируют при температуре 20-22 °С в течение 3-4 суток. После инкубации подсчитывают число колоний грибов на обеих чашках, находят среднее арифметическое, и путем суммирования определяют число микроорганизмов, отражающее ОМЧ исследуемой дистиллированной воды.
2. Определение коли-титра дистиллированной воды до стерилизации
может быть проведено одним из двух методов:
а) Двухфазный бродильный метод (см.: Н. П. Блинов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии для фармацевтических факультетов и институтов. 1988. С. 79-81).
б) Метод мембранных фильтров. Метод позволяет проводить по сев воды непосредственно в аптеке, пропустив необходимое ее количество через мембранные фильтры. Фильтры кладутся на поверхность среды Эндо и после доставки в лабораторию помещаются в термостат. После двухсуточной инкубации в термостате учитывается рост колоний. Внимание обращается на наличие лактозоположительных колоний (темно-красные, с металлическим блеском). Расчет величины коли-титра ведется исходя из количества воды, пропущенной через мембранный фильтр, и числа выросших лактозоположительных колоний.
Санитарные требования к получению, транспортировке и хранению дистиллированной воды (очищенной и воды для инъекций) даны в Приказе № 309, п. 7.
Ситуационные задачи по теме
1. Для микробиологического контроля взята дистиллированная вода из бюретки над столом ассистента. Перед взятием заборщикне обжег края бюретки. Получены следующие результаты: коли-титр — 300 мл, ОМЧ — 173 КОЕ/мл.
Правильно ли был проведен забор воды? Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?
2. Для микробиологического контроля дистиллированной воды проба взята из бюретки над столом ассистента. Перед взятием пробы заборщик обжег края бюретки в пламени спиртовки. Получены следующие результаты: коли-титр — 500 мл, ОМЧ — 8 КОЕ/мл.
Правильно ли проведен забор воды? Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?
3. Дистиллированная вода, предназначенная для приготовления глазных капель, взята из баллона сразу после перегонки и послана на микробиологическое исследование. Получены следующие результаты: ОМЧ — 20 КОЕ/мл, энтеробактерии не обнаружены.
Как трактовать полученные результаты?
Можно ли использовать такую дистиллированную воду для приготовления глазных капель?
4. Дистиллированная вода, предназначенная для приготовления глазных капель, взята из баллона сразу после перегонки и послана на микробиологическое исследование. Получены следующие результаты: ОМЧ — 83 КОЕ/мл, энтеробактерии не обнаружены.
Как трактовать полученные результаты? Соответствуют ли они нормативам?
Можно ли использовать данную воду для приготовления глазных капель?
5. На микробиологическое исследование поступила дистиллированная вода, используемая для приготовления лекарственных форм (кроме инъекционных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 175 КОЕ/мл, коли-титр — 100 мл, выявлен рост протея, грибы не обнаружены.
Соответствуют ли полученные данные нормативам? Можно ли использовать эту воду по назначению?
6. На исследование поступила дистиллированная вода, используемая для приготовления лекарственных форм (кроме инъекциионных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 11 КОЕ/мл, коли-титр — 300 мл, протей отсутствует, отмечено наличие плесневых грибов.
Как трактовать полученные результаты?
Соответствуют ли они нормативам?
Можно ли использовать эту воду по назначению?
7. На микробиологическое исследование поступила дистиллированная вода, предназначенная для приготовления лекарственных форм (кроме инъекционных растворов и глазных капель). Получены следующие результаты: ОМЧ — 10 КОЕ/мл, коли-титр — 500 мл, плесневые грибы, протей отсутствуют.
Как трактовать полученные результаты?
Соответствуют ли они нормативам?
Можно ли использовать эту воду по назначению?
(!!!) Практическая работа
Задание 1
Проведено микробиологическое исследование дистиллированной воды для инъекций до стерилизации. Вода взята на исследование через 1 час после перегонки.
Для определения ОМЧ по 1 мл воды было засеяно в расплавленный МПА на 2 чашки.
Для определения грибов по 0,5 мл воды было засеяно на среду Сабуро в 2 чашки Петри.
Для определения энтеробактерии через мембранный фильтр было пропущено 500 мл воды и фильтр сразу же был перенесен на среду Эндо.
Полученные результаты представлены в таблице.

Показатель	Число колоний на МПА (ОМЧ)	Число колоний грибов на среде Сабуро	Кишечная палочка и другие энтеробактерии на фильтре (среда Эндо)	Прочие УПБ
Исследуемая вода	21	1 колония плесневых грибов	1 колония «лак+», 1 колония «лак-»	—
Нормативы	до 15 сапрофитов	-	-	-

Определите ОМЧ исследуемой воды, которое будет складываться из двух показателей: количества колоний на МПА и количества колоний грибов на среде Сабуро (предварительно находят среднее количество колоний, выросших на 2 чашках МПА и 2 чашках со средой Сабуро).
Результаты идентификации лактозонегативной колонии: грамотрицательная палочка, агглютинируется комплексной сальмонеллезной сывороткой, с групповой сальмонеллезной сывороткой О-9 и с типовой сальмонеллезной — Н g, m.
Определите количество грибов на среде Сабуро.
Сопоставьте полученные результаты с нормативами и дайте заключение по данному виду воды. Определите возможные причины, приведшие к контаминации воды, и дайте рекомендации по предотвращению данной ситуации. Какие последствия возможны при применении такой воды?
Задание 2
В аптеке для микробиологического исследования взята вода дистиллированная, используемая для приготовления лекарственных средств (кроме глазных капель и инъекционных растворов).
Для определения ОМЧ по 1 мл воды было засеяно в расплавленный МПА на 2 чашки.
Для определения грибов по 0,5 мл воды было засеяно на 2 чашки со средой Сабуро.
Для определения энтеробактерий через мембранный фильтр было пропущено 500 мл воды и фильтр сразу же был перенесен на среду Эндо.
Полученные результаты представлены в таблице.

Показа­тель	Число колоний на МПА (ОМЧ)	Число коло­ний грибов на среде Сабуро	Кишечная палочка и другие энтеробактерии на фильтре (среда Эндо)	Прочие УПБ
Исследуе­мая вода	5	—	1 колония «лак+»,	—
Нормати­вы	до 100 сапрофитов		коли-титр — 500 мл, коли-индекс — 2 других энтеробактерий не должно быть

Определите ОМЧ исследуемой воды, которое будет складываться из двух показателей: количества колоний на МПА и количества колоний грибов на среде Сабуро (предварительно находят среднее число колоний, выросших на 2 чашках МПА и 2 чашках Сабуро).
Определите коли-титр и коли-индекс исследуемой воды.
Проанализируйте колонии, выросшие на фильтре, и дайте заключение по фекальному обсеменению исследуем. воды.
Дайте заключение по санитарно-микробиологическому состоянию данной воды. Какие последствия возможны при применении такой воды?
Задание 3
Проведено микробиологическое исследование дистиллированной воды для инъекций до стерилизации. Вода взята на исследование через 1 час после перегонки.
Для определения ОМЧ по 1 мл воды было засеяно в расплавленный МПА на 2 чашки.
Для определения грибов вода был засеяна по 0,5 мл на 2 чашки со средой Сабуро.
Для определения энтеробактерий через мембранный фильтр было пропущено 500 мл воды и фильтр сразу же был перенесен на среду Эндо.
Полученные результаты представлены в таблице.

Показа­тель	Число колоний на МПА (ОМЧ)	Число коло­ний грибов на среде Сабуро	Кишечная палочка и другие энтеробактерии на фильтре (ср. Эндо)	Прочие УПБ
Исследуе­мая вода	74	—	-	2 колонии грам "-"
Нормати­вы	до 15 сапрофитов	-	-	-

Определите ОМЧ исследуемой воды, которое будет складываться из 2 показателей: количества колоний на МПА и количества колоний грибов на среде Сабуро (предварительно находят среднее количество колоний, выросших на 2 чашках с МПА и 2 чашках со средой Сабуро).
По приведенным ниже признакам идентифицируйте выделенные микроорганизмы: грамотрицательные палочки, капсула отсутствует, рост в виде пленки на поверхности МПБ, среды окрашены сине-зеленым пигментом.
Дайте заключение по санитарно-микробиологическому состоянию исследуемой воды. Определите возможные причины, приведшие к данной ситуации. Дайте рекомендации по предотвращению загрязнения воды. Какие последствия возможны при применении такой воды?
Задание 4
Для микробиологического исследования в аптеке взята водопроводная вода с соблюдением всех условий, предусмотренных правилами забора.
Для определения ОМЧ по 1 мл воды было засеяно в расплавленный МПА на 2 чашки, которые были оставлены в термостате на 48 часов.
Для выявления грибов по 0,5 мл исследуемой воды засеяли на 2 чашки со средой Сабуро.
Через мембранный фильтр для определения коли-титра и коли-индекса было пропущено 500 мл исследуемой воды. Фильтр поместили на чашку со средой Эндо.
Полученные результаты приведены в таблице (стр. 46).

Показа­тель	Число ко­лоний на МПА (ОМЧ)	Число коло­ний грибов на среде Сабуро	Кишечная палочка и другие энтеробак- терии на фильтре (среда Эндо)	Прочие УПБ
Исследу­емая вода	125	—	2 колонии «лак+»	—
Нормати­вы	до 100 сап-рофитов		коли-титр — 500 мл, коли-индекс — 2, других энтеробактерий не должно быть

Проанализируйте полученные результаты. Сделайте заключение по санитарно-микробиологическому состоянию воды. Определите возможные причины фекального загрязнения водопроводной воды. Какие последствия возможны при использовании данной воды в аптеке?
Задание 5
Вода для инъекций до стерилизации была взята на микробиологическ исследование спустя 1 час после ее перегонки.
Для определения ОМЧ по 1 мл воды было засеяно в расплавленный МПА на 2 чашки.
Для определения грибов вода по 0,5 мл была засеяна на 2 чашки со средой Сабуро.
Для определения энтеробактерий через мембранный фильтр было пропущено 500 мл воды и фильтр сразу же был перенесен на среду Эндо.
Полученные результаты приведены в таблице.

Показатель	Число колоний на МПА (ОМЧ)	Число колоний грибов на среде Сабуро	Кишечная палочка и другие энтеробактерий на фильтре (среда Эндо)	Прочие УПБ
Исследуемая вода	12	—	—	4 колонии грам «-» -
Нормативы	до 15 сапрофитов	—	—

Определите ОМЧ исследуемой воды, которое будет складывать­ся из двух показателей: количества колоний на МПА и количества колоний грибов на среде Сабуро (предварительно находят средне количество колоний, выросших на 2 чашках с МПА и 2 чашках со средой Сабуро).
По приведенным ниже признакам идентифицируйте выделенные микроорганизмы: грамотрицательные палочки, капсула отсутствует, рост по Шукевичу — положительный, на МПБ дают индол и сероводород.
Дайте заключение по санитарно-микробиологическому состоянию исследуемой воды. Определите возможные причины, приведшие к данной ситуации. Дайте рекомендации по предотвращению загрязнения воды. Какие последствия возможны при применении такой воды?