Клинический опыт показывает, что при многократных гемотрансфузиях крови и эритроцитной массы вследствие аллоиммунизации нередко возникают посттрансфузионные негемолитические реакции. Они связаны главным образом с лейкоцитами в трансфузионных средах. В этой связи освобождение (обеднение) крови, эритроцитной массы и концентратов тромбоцитов от лейкоцитов имеет важное значение в клинической трансфузиологии. Определенная группа больных, которым необходимы трансфузии эритроцитной массы, обедненной лейкоцитами (ЭМОЛТ), которая должна содержать в одной дозе менее 0,5х 106 лейкоцитов, т.е. менее 20% от исходного числа, нуждаются именно в этой трансфузионной среде.
ЭМОЛТ может быть получена несколькими способами:
  • методом серийного центрифугирования консервированной крови с последующим удалением плазмы вместе с лейкотромбоцитарным слоем и повторным отмыванием эритроцитов раствором хлорида натрия;
  • методом ускоренной седиментации эритроцитов при разведении большими объемами растворов сахаров с последующим удалением плазмы вместе с лейкоцитами и тромбоцитами;
  • применением коллоидных осадителей для седиментации эритроцитов, удаления плазмы, обогащенной лейкоцитами и тромбоцитами;
  • путем фильтрации эритроцитной массы (после удаления плазмы и лей- котромбоцитарного слоя) через специальные фильтры (нейлон, данулон и др.);
  • методом криоконсервирования эритроцитов и их последующим размораживанием и отмыванием.

В нашей лаборатории проведены детальные исследования (В.А. Агранен- ко, Р.И. Волкова) распределения лейкоцитов и тромбоцитов в объеме хранившейся консервированной крови. Исследования показали, что для получения ЭМ, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами, необходимо использовать хорошо седиментированную или центрифугированную кровь. В се- диментированной крови через сутки концентрация тромбоцитов в надстой- ной плазме значительно выше над слоем эритроцитов, а в самой эритроцитной массе их число менее 10х106 в 1 мл. В целом выход тромбоцитов в плазму зависит от ее объема — чем больше объем отстоенной плазмы, тем выше в ней количество тромбоцитов. Послойное распределение лейкоцитов в седиментированной крови 1—5 дней хранения также имеет свою закономерность. Основная масса лейкоцитов концентрируется в лейкотромбоци- тарном слое, непосредственно над эритроцитами (130хЮ6 клеток в 1 мл). В верхних слоях ЭМ, прилегающих к лейкопленке, эта концентрация клеток снижается до 5— 10х Ю6в 1 мл, не изменяясь на протяжении всего слоя эритроцитов. Концентрация лейкоцитов в лейкопленке в течение 24 ч седиментации также коррелирует с объемом отстоенной плазмы, т.е. чем больше объем плазмы, тем меньше содержание лейкоцитов в ЭМ. С увеличением срока хранения крови (3—5 дней) объем отстоенной плазмы увеличивается и вместе с этим возрастает степень обеднения ЭМ лейкоцитами (составляет в среднем 1,5х 109 ).
На основании этих закономерностей распределения клеток крови при ее седиментации в нашей лаборатории были отработаны (В.Л. Голубева) режимы центрифугирования с целью получения ЭМОЛТ.
Оптимальным режимом центрифугирования крови 1—2 дней хранения в стеклянных флаконах (250 мл) оказался режим 1700g (2500 об/мин) в течение 11 мин. При условии удаления после центрифугирования вместе с плазмой лейкотромбоцитарной пленки и подлежащего слоя эритроцитов высотой 1 см из консервированной крови 1—2 дней хранения удаляется 73+4% лейкоцитов от их исходного количества.
Если такая ЭМ с удаленным лейкотромбоцитарным слоем подвергается дву- или троекратному отмыванию 0,9% раствором хлорида натрия с центрифугированием при режиме 2400g (3000 об/мин) в течение 5 мин, а остаток лейкоцитов удаляют вместе с надстоем и подлежащими эритроцитами (высота 0,5 см), то в полученной ЭМОЛТ удаляется около 90% лейкоцитов, а остаточная концентрация их в ЭМ не превышает 0,5х 106 клеток в 1 мл.
Для получения ЭМОЛТ, заготовленной в полимерные контейнеры, она подвергается центрифугированию при 2000g в течение 20 мин с последующим удалением лейкотромбоцитарного слоя и 2—3-кратным отмыванием 0,9% раствором хлорида натрия с режимом центрифугирования 2000gx5 мин. При этом удается удалить 90—96% лейкоцитов и полностью удалить тромбоциты.
Следует подчеркнуть, что ЭМОЛТ не подлежит хранению и должна быть использована в течение первых часов, но не позднее 24 ч после заготовки.
Приведенные методы позволяют обеспечить трансфузионную службу лечебных учреждений эритроцитной массой, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами.
В практике службы крови большое распространение получил метод получения ЭМОЛТ путем серийного центрифугирования и повторного 3—5- кратного отмывания эритроцитной массы. Однако этот метод отличается большой трудоемкостью и потерями ЭМ (до 20—30%). В нашей лаборатории были проведены специальные исследования (В.Л. Голубева, Н.Н.Тиблова, В.А. Аграненко), позволившие упростить и повысить эффективность метода получения ЭМОЛТ. Для этого предпочтительно использовать ЭМ 2—7 суток хранения, а специальные режимы центрифугирования при ограниченном (2-кратном) числе отмываний обеспечивают удаление 90—95% лейкоцитов. Из ЭМ, хранившейся не более суток, удается таким методом удалить около 85% лейкоцитов. Разработан также и новый метод (В.А. Аграненко, Р.И. Волкова) получения ЭМОЛТ, заключающийся в кратковременном (15 мин) прогревании (37 °С) дозы консервированной крови 2—5 дней хранения с последующим центрифугированием и удалением плазмы и лейкотромбоцитарного слоя (без использования отмывания ЭМ). Этот метод позволяет удалить 82—90% лейкоцитов.
За рубежом для получения ЭМОЛТ широко используются специальные лейкоцитарные и тромбоцитарные фильтры, обеспечивающие удаление 90—99% клеток. Как показал наш клинический опыт, эти фильтры дали возможность проводить трансфузии ЭМ без сопутствующих посттрансфузион- ных реакций даже у аллоиммунизированных больных с наличием антилей- коцитарных антител, имеющих в анамнезе многократные переливания. У нас в стране подобные фильтры широко не применяются из-за высокой их стоимости, а отечественные фильтры находятся в стадии разработки.
Криоконсервирование эритроцитов является одним из методов обеднения их лейкоцитами. Эритроциты, которые замораживались в день взятия крови и отмывались методом агломерации по Huggins, сохраняли наименьшее число лейкоцитов, а замороженные с 40% глицерином и отмытые на сепараторах сохраняли менее 5% исходного числа лейкоцитов. При использовании метода криоконсервирования с 20% глицерином эритроциты содержали еще меньше (2—10%) остаточных лейкоцитов. Таким образом, метод криоконсервирования эритроцитов с последующим размораживанием и отмыванием может быть использован для обеднения эритроцитной массы лейкоцитами, однако, и он не может считаться оптимальным.