Лабораторные методы выделения моноцитов разнообразны, но основные методические приемы преимущественно связаны с фракционированием моноцитов по способности прилипать к стеклу или пластиковой поверхности или по способности при центрифугировании к локализации в определенных зонах ступенчатого градиента.
Выделение моноцитов по способности прилипать к стеклу или пластику
Принцип метода. Моноциты периферической крови человека получают выделением мононуклеарных клеток по методу Воушп с последующим их фракционированием на прилипающие (ПК) и неприлипающие клетки (НПК). Для получения моноцитов монону- клеарные клетки, выделенные в одноступенчатом градиенте фиколл- урографина, разделяют на ПК и НПК, используя способность клеток моноцитарно-макрофагального ряда прилипать к стеклу и пластику. Для этого суспензию мононуклеаров в концентрации 2х106 кл/мл культивируют в среде 199, содержащей 20% сыворотку эмбриона коровы (СЭК), при 37 °С в пластиковых чашках Петри. Через 40 мин собирают НПК, а ПК снимают со дна чашки охлажденным (4—6 °С) раствором Версена, который заливают по 1 мл в чашку сразу после удаления надосадочной жидкости. Через 1—2 мин собирают ПК, помещают в силиконированные центрифужные пробирки и центрифугируют при 200 g в течение 10 мин. Удаляют надосадочную жидкость и ПК ресуспендируют в среде 199 с 10% СЭК.
r I
Метод Рекалде
Принцип метода. Данный метод выделения моноцитов основан на центрифугировании лейкоцитов в гипертоническом градиенте плотности фиколл-урографина (Recalde Н., 1984).
Выделение моноцитов по способности прилипать к стеклу или пластику
Принцип метода. Моноциты периферической крови человека получают выделением мононуклеарных клеток по методу Воушп с последующим их фракционированием на прилипающие (ПК) и неприлипающие клетки (НПК). Для получения моноцитов монону- клеарные клетки, выделенные в одноступенчатом градиенте фиколл- урографина, разделяют на ПК и НПК, используя способность клеток моноцитарно-макрофагального ряда прилипать к стеклу и пластику. Для этого суспензию мононуклеаров в концентрации 2х106 кл/мл культивируют в среде 199, содержащей 20% сыворотку эмбриона коровы (СЭК), при 37 °С в пластиковых чашках Петри. Через 40 мин собирают НПК, а ПК снимают со дна чашки охлажденным (4—6 °С) раствором Версена, который заливают по 1 мл в чашку сразу после удаления надосадочной жидкости. Через 1—2 мин собирают ПК, помещают в силиконированные центрифужные пробирки и центрифугируют при 200 g в течение 10 мин. Удаляют надосадочную жидкость и ПК ресуспендируют в среде 199 с 10% СЭК.
r I
Метод Рекалде
Принцип метода. Данный метод выделения моноцитов основан на центрифугировании лейкоцитов в гипертоническом градиенте плотности фиколл-урографина (Recalde Н., 1984).