Для специфического выявления активных районов ядрышковых организаторов (ЯОР), локализованных в коротких плечах акроцентрических хромосом человека, используют метод окраски нитратом серебра с желатиной. Интенсивно окрашиваются в черный цвет лишь те ЯОР, которые были активны в предшествующей интерфазе. Неактивные ЯОР при этом способе не детектируются. Благодаря ярко выраженному полиморфизму, ЯОР могут быть использованы для характеристики индивида и для установления родительского происхождения дополнительных акроцентрических хромосом при гетероплоидии.
Растворы
- 50%-й раствор азотнокислого серебра на деионизированной (можно на бидистиллированной) воде.
- 2%-й раствор желатина на дистиллированной воде.
- Муравьиная кислота.
- 5%-й раствор гипосульфита натрия.
Протокол 6.1
- На препарат под каждое покровное стекло 24x24 мм нанести 2 капли смеси желатина и муравьиной кислоты (1 мл кислоты на 100 мл желатины, смешивать непосредственно перед употреблением) и 1 каплю (50-60 мкл) раствора серебра.
- Инкубировать во влажной камере при 37 °С 20-60 мин, контролируя интенсивность окраски визуально и под микроскопом.
- По окончании окрашивания (потемнение до серо-коричневого цвета красящей смеси и светлые желто-коричневые ядра на препарате) смыть покровные стекла проточной водой и поместить препараты на 30 сек в гипосульфит натрия.
- Промыть проточной водой и высушить.
- Для анализа в проходящем свете препараты можно докрасить раствором красителя Гимза, используя рутинный (Протокол 2.1) или G-метод (Протоколы 3.1, 3.2, 3.4). При анализе ЯОР-препаратов, окрашенных с помощью QFH-метода, необходимо комбинирование люминесцентного и проходящего освещения.
Примечания
- При перекрашивании препарата (окрашивание хромосом в коричневый цвет) инкубирование в гипосульфите можно продолжить, увеличив его концентрацию в растворе. Можно использовать с этой целью насыщенный раствор красной кровяной соли.
- Успешное окрашивание существенно зависит от партии всех используемых реактивов.
- На всех этапах следует соблюдать крайнюю осторожность, т. к. пятна серебра не поддаются полному удалению с оптики, одежды и пр.