Лазерное излучение обладает рядом уникальных свойств,
определяющих результат его взаимодействия с биологическими тканями. К числу основных следует отнести: высокие монохроматичность,
временную и пространственную когерентность, направленность,
поляризованность, значительные интенсивность и яркость излучения, сверхкороткую длительность импульсов генерации и способность к перестройке длины волны.
Монохроматичность - это свойство осциллятора излучать свет строго определённой частоты и амплитуды в течение бесконечно долгого времени. Характеризуется степенью монохроматичности. Степень
монохроматичности dn одномодового лазера определяется шириной линии генерации возбужденной моды A v на частоте v:
. (2-1)
Теоретический предел для Av, определяемый квантовыми флуктуациями, чрезвычайно мал и для различных лазеров непрерывного действия лежит в пределах от долей герца до десятков килогерц. Ширина линии генерации определяется вероятностью спонтанных переходов:
(2-2)
где A21 - вероятность спонтанного перехода; B21 - коэффициент
Эйнштейна; р21 - спектральная объёмная плотность энергии.
В реальных условиях линия генерации дополнительно уширяется за счёт вибраций, акустических шумов, плазменных колебаний в активной среде и составляет величину от десятков герц до десятков мегагерц. Для импульсных лазеров ширина линии ограничена длительностью импульса т и может составлять довольно значительные величины (т=1 нс, Avx1 ГГц):
(2-3)
Для лазеров, работающих на многих продольных модах, ситуация усложняется. В зависимости от решаемых задач и конкретных условий измерений можно обеспечить различную степень монохроматичности. С одной стороны, отдельная мода практически сохраняет свою высокую монохроматичность (узкая ширина линии Av), а с другой стороны, мод становится много и их спектр занимает уже полную ширину Avm :
(2-4)
где N - число мод; - частотное расстояние между модами,
определяемое оптической длиной резонатора nL .
Если вещество исследуемого объекта имеет спектральную структуру, сравнимую с Av , и в схеме измерений обеспечено выделение
отдельной моды, то монохроматичность лазера может быть использована в полном объёме. В противном случае монохроматичность будет определяться полной шириной спектра Avm. Более того, в ряде задач, например, при получении периодической последовательности сверхкоротких импульсов, необходимо возбуждать как можно больше мод, чтобы расширить полосу и образовать последовательность очень коротких импульсов света за счёт фазовой синхронизации мод, т.к.
(2-5)
Различают однородное и неоднородное уширение. Однородное уширение связано с конечным временем жизни энергетических уровней и происходит одновременно и одинаковым образом для всего ансамбля частиц (форма Лоренца). Неоднородное уширение определяется индивидуальными свойствами частиц (форма Гаусса).
Высокая монохроматичность определяет высокую спектральную плотность излучения. Например, для типичного лазера с выходной мощностью 1 Вт, шириной линии 1 МГц, диаметром пучка 2 мм и X =500 нм спектральная плотность мощности на единице поверхности равна 2,6x10 Вт/см . Для сравнения аналогичная величина для солнечного излучения равна 1,3x10" Вт/см .
Временная когерентность - это способность излучения образовывать чёткую интерференционную картину при соответствующей временной задержке складываемых пучков. Удобно временную когерентность характеризовать длиной когерентности lc:
(2-6)
Для одномодовых лазеров непрерывного действия длина когерентности, т.е. допустимая длина разности хода интерферирующих пучков, может быть чрезвычайно большой (а именно: 3х106^3х1010 м при Av=100 Гц^10 ГГц), что, вообще говоря, превосходит типичные потребности биологических и медицинских исследований. Для импульсных лазеров длина когерентности определяется длительностью импульса т. Для многомодовых лазеров с непрерывной накачкой степень когерентности в зависимости от расстояния носит осциллирующий
снова восстанавливается на длине, равной двум, четырём и так далее длинам резонатора. Полная потеря когерентности произойдёт лишь на
длине
При использовании многомодовых лазеров
в интерференционных и голографических измерениях необходимо обращать внимание на это обстоятельство. Так, для Не-№ лазера
Тепловые источники (например,натриевая лампа (одна линия)) имеют время когерентности порядка 100 пс, т.е. lc =0,03 м. Заметим, что лазеры с субнаносекундной длительностью импульсов или с шириной полосы генерации в несколько гигагерц имеют такую же малую длину когерентности. В то же время одномодовые лазеры могут иметь чрезвычайно большую длину когерентности.
Монохроматичность, или высокая спектральная плотность мощности (интенсивности) излучения, или значительная временная когерентность лазерного излучения, обеспечивает: во-первых, проведение спектрального анализа с разрешением, на много порядков превышающим разрешение традиционных спектрометров; во-вторых, высокую степень селективности возбуждения определённого сорта молекул в их смеси, что очень важно именно для биотехнологий; в-третьих, реализацию голографических и интерферометрических методов диагностики биообъектов.
Мерой пространственной когерентности является видность V (S) интерференционной картины, образованной двумя пучками света от пространственно разделенных расстоянием X участков излучения источника света:
(2-7)
где Imax - интенсивность света в максимуме интерференционной картины;
I min - интенсивность света в минимуме интерференционной картины.
V(S)=1 соответствует полной когерентности, V(S)=0 соответствует полному отсутствию когерентности.
Площадь
, в пределах которой видность выше 0,7 , называется площадью когерентности.
Пространственная когерентность даёт возможность получать пучки света с высокой степенью их направленности (коллимированности) и позволяет фокусировать их на объекте до чрезвычайно малых размеров, что в отличие от тепловых источников обеспечивает высокие дистанционность и локальность воздействия. Лазеры, как правило, излучают пространственно-когерентные гауссовы пучки (ТЕМ00-мода):
(2-8)
где I(0, z) - интенсивность в центре пучка, при r = 0; аgt;(z) - радиус пучка лазера (т.е. расстояние от оси пучка до точки, где интенсивность изменяется в "е" раз по сравнению со значением I(0, z)); z - продольная координата.
Расходимость гауссова пучка
определяется как:
, (2-9)
где X - длина волны излучения; - радиус пучка в перетяжке.
Параметры 0 и o0 являются важными характеристиками лазеров и задаются в основном конфигурацией резонатора. При достаточном
радиус лазерного пучка o(z)
определяется соотношением:
(2-10)
о
Заметим, что расширение пучка с помощью соответствующей оптической системы позволяет уменьшить расходимость, так как
(2-11)
Гауссов пучок имеет минимально возможную расходимость. Лазерные пучки в режиме поперечной моды низшего порядка (ТЕМ00) характеризуются чрезвычайно высокой пространственной когерентностью, близкой к предельной, обусловленной квантовыми флуктуациями, и только примесь поперечных мод высших порядков может существенно её уменьшить.
Для большинства лазеров расходимость составляет несколько тысячных радиана (миллирадиан, мрад). Такой пучок можно
сфокусировать до очень малых размеров. Диаметр пучка в фокусе линзы d с фокусным расстоянием F :
. (2-12)
Для очень короткофокусных оптических систем (микроскопов и пр.) F lt; шо0, следовательно, пучок можно сфокусировать до размеров порядка длины волны. Однако для сильно расходящихся пучков, например, в случае полупроводниковых лазеров, такие возможности ограничены, т.к. требуются слишком малые значения F, недостижимые на практике.
Существует возможность уменьшения 0 излучения самого лазера разнообразными приёмами, например, применением внутрирезонаторных телескопов или ВРМБ-зеркал. Такими способами удаётся снизить расходимость более чем на порядок.
Важно отметить, что в ряде биологических приложений сфокусированный "рабочий" пучок оказывается существенно меньше размеров длины волны и составляет около 0,01 мкм, поскольку действие светового излучения зависит от интенсивности и носит пороговый характер. Если при облучении объекта интенсивность пучка подобрать так, чтобы пороговые условия для конкретного исследуемого объекта выполнялись только в самом центре пучка, то воздействующая на биообъект часть пучка будет существенно меньше его реальных размеров. Таким способом можно, например, проводить тонкую внутриклеточную хирургию.
Важной характеристикой для биологических приложений является глубина резкости фокусировки AF, которая лежит в основе лазерной
продольный размер объёма
сфокусированного пучка . Видно, что при d gt; Л глубина резкости
фокусировки AF больше диаметра пучка света d в фокусе линзы.
Роль расходимости излучения можно представить себе, если сравнить интенсивности излучения, полученные от теплового и лазерного источников одинаковой мощности P, расположенных на расстоянии z от биообъекта. Так, для теплового источника интенсивность составляет
, для лазерного источника -
. Тогда
Лазеры характеризуются высокой степенью поляризованности излучения, что является следствием когерентности их излучения. Однако вид поляризации (линейная, круговая, эллиптическая) у разных лазеров может быть различен. В большинстве случаев тип поляризации связан со свойствами оптического резонатора, а иногда и с особенностями активной среды (среда во внешнем магнитном поле). Резонаторы газовых лазеров с очень сильной амплитудной анизотропией, создаваемой брюстеровскими "окнами" разрядной трубки или внутренними призмами, имеют устойчивую линейную поляризацию. Для промышленных лазеров с линейной поляризацией степень поляризованности, т.е. отношение интенсивностей света при взаимно-ортогональных положениях поляризационного анализатора, может достигать нескольких сотен. Для лазеров с малым усилением (анизотропные резонаторы) квантовые и технические флуктуации практически не приводят к деполяризации излучения. Для лазеров, имеющих значительный коэффициент усиления активной среды, внешнее магнитное поле существенно влияет на характер поляризации. Достаточно часто используют лазеры с изотропными резонаторами, при этом обеспечивается практически идеальная круговая поляризация выходного излучения, со степенью поляризованности, которая близка к единице. В многомодовых лазерах с изотропными резонаторами (или со слабой анизотропией) поляризация отдельных мод изменяется сложным образом в зависимости от изменения параметров лазеров, и для некоторых промышленных лазеров это служит причиной скачков и медленных изменений поляризации, а следовательно, значительной нестабильности оптической мощности в измерительном тракте, содержащем оптические элементы. Передача лазерного излучения по волоконным световодам круглого сечения приводит к деполяризации излучения за счёт возбуждения волноводных мод. В зависимости от качества световода длина, на которой происходит полная деполяризация излучения, изменяется от нескольких сантиметров до нескольких метров. Медицинские световоды с диаметром сердцевины 400^1000 мкм имеют малую длину деполяризации на уровне нескольких сантиметров.
Разработаны анизотропные одномодовые световоды, которые сохраняют состояние поляризации, но поперечный размер их сердцевины чрезвычайно мал (5^7 мкм), что затрудняет ввод излучения в такие световоды.
Высокая интенсивность лазерного излучения позволяет сконцентрировать в малом объёме значительную световую энергию. Во многих случаях важна высокая спектральная плотность интенсивности излучения, которая при равных мощностях, приходящихся на одинаковые площади поверхности, оказывается существенно выше у лазерного источника, чем у теплового. Разница появляется из-за более узкой спектральной линии лазера по сравнению с тепловым источником, и она может составлять от нескольких до десятков порядков. К важнейшим параметрам источника света относится не только мощность и интенсивность, но и яркость, определяемая как интенсивность в телесном угле.
Одним из замечательных свойств лазеров является возможность получения импульсов пикосекундной и субпикосекундной длительностей. В видимой области удалось вплотную подойти к теоретическому пределу по длительности (два-три периода световых колебаний) и сформировать импульс длительностью порядка 6 фс, что составляет всего три световых колебания. Это даёт возможность изучать очень быстрые первичные фотопроцессы в биологии прямыми, а не косвенными методами, а также многоступенчато возбуждать высокие энергетические состояния молекул за время значительно меньшее, чем скорость релаксации любого промежуточного состояния. Для изучения большинства быстрых фотопроцессов в биологии достаточной оказывается длительность импульсов в несколько пикосекунд, но для изучения ультрабыстрых стадий преобразования энергии некоторыми молекулами необходимы и субпикосекундные источники (около 100 фс).
Свойство лазеров перестраивать длину волны в совокупности с высокой монохроматичностью излучения позволяет использовать их в качестве источников для спектрометров ультравысокого разрешения. Любой лазер допускает перестройку частоты (длины волны). Правда, для одних лазеров она может быть только дискретной с очень узким диапазоном перестройки вблизи дискретных длин волн, а для других - "непрерывной" в довольно широком диапазоне длин волн. Наличие перестраиваемых лазеров во всем диапазоне от УФ до ИК позволяет селективно возбуждать практически любые состояния биомолекул и отдельных её фрагментов.
Одним из важных для применения лазеров свойств является их способность формировать спекл-картину при отражении когерентного света от шероховатой поверхности. Рассеянный поверхностью свет состоит из хаотического скопления тёмных и светлых пятен (спеклов). Если спекл-картина наблюдается на экране, удалённом от объекта на
L0 gt;gt; d , то средний диаметр зерна (спекла) d = ——. Спекл-картина
а{ z)
формируется за счёт сложной интерференции вторичных волн от небольших рассеивающих центров, расположенных на поверхности объекта и в приповерхностном слое, куда проникает свет. Поскольку биообъекты в большинстве своём шероховаты и оптически неоднородны, то они всегда должны формировать спекл-картину и тем самым вносить некоторые искажения в результаты исследований. С другой стороны, спекл-поле несёт информацию о свойствах поверхности и
приповерхностного слоя, что можно использовать, например, в диагностических целях.