В 1948 г. Орьян Оухтерлони (Orjan Ouchterlony) и независимо от него Стефан Элек (Stephen Elek) опубликовали разработанную ими методику двойной, или встречной, иммунодиффузии, т.е. диффузии антител и антигенов навстречу друг другу в геле. Эти исследователи обнаружили и использовали физико-химические свойства агарового геля, поры которого имеют размеры, достаточные, чтобы пропустить (дать возможность диффундировать) молекулы свободных антител и многих растворимых антигенов, но задерживающие более крупные по размеру комплексы антител с антигенами. В результате в месте встречи антител с антигенами выпадает осадок; в геле он виден невооруженным глазом как полоса преципитации. Оухтерлони и Элек подобрали концентрацию агар-агара — 1,25—1,5%.
Порядок постановки реакции следующий.
- Агар растворяют в физиологическом растворе при 56 °С (температура расплавления агара).
- В виде золя агар выливают на плоское стекло. При охлаждении до комнатной температуры агар застывает в гель.
- В застывшем геле пробивают трубочкой-пробойником правильные круглые отверстия (лунки) небольшого диаметра (-2—3 мм).
- В эти лунки вносят образцы антисыворотки и растворы анти
генов.
- Оставляют на диффузию в течение 16—24 ч, по истечении которых можно наблюдать полосы преципитации, если в исследуемых образцах присутствовали комплементарные друг другу лиганды.
Метод Оухтерлони и Элека иллюстрирует рис. 4.1. (см. также цв. вклейку).